摘要：大草乌向后弯曲，无毛;雄蕊多数，花丝全缘或有2枚小齿，无毛;心皮5，无毛或上部疏生短毛。莴葖果，长1.6-1.8cm，无尾。种子多数，三棱形，长约3mm，只在一面密生横膜翅。花期8-9月，果期9-10月。
关键词：大草乌,抗氧化性,农业技术,农业科技论文发表
黄草乌，多年生昌本。块根椭圆球形或胡萝卜形，长2.5-7cm，直径约1cm。茎缠绕，长达4m，有分枝，疏被反曲短柔毛或几无毛。叶互生;叶柄与叶片近等长;叶片五角形，长5-10cm，宽8-16cm，基部宽心形，3全裂或达近基部，中央全裂片宽菱形，侧全裂片斜扇形，不等2裂略超过中部，上面疏被紧贴的短柔毛，下面叶脉疏被短柔毛。花序有3-6朵花，花序轴和花梗密被淡黄色反曲短柔毛;苞片线形;花梗长2-4cm;小苞片生花梗中部或下部，狭线形，长3-5mm，密被短柔毛;花两性，两侧对称;萼片5，花瓣状，上萼片高盔形，高1.7-2cm，下缘1.5-1.6cm，与外缘毛;花瓣2，唇长约6mm，微凹，距长约3mm，
膝瓣乌头，多年生草本，高约1m。茎直立，具分枝，无毛。叶互生;叶柄长3-5cm，基部具鞘，无毛;叶片圆五角形，长宽均为6-10cm，基部心形，3深裂至近基部，中央深裂片菱形，3裂，侧深裂片斜扇形，2深裂超过中部，上面只脉上疏被紧贴的短柔毛，下面无毛。总状花序近伞房状，长3-8.5cm，有花2-8朵;花序轴和花梗均无毛;苞片叶状;花梗长2-4cm;小苞片生花梗中部，线形，长3.5-4.5cm，无毛。花两性，近两侧对称;花萼5，花部，线形，长3.5-4.5cm，无毛。花两性，近两侧对称;花萼5，花瓣状，上萼片高盔形，高约1.6cm，下缘长1.5-1.8cm，外缘近垂直，与下缘形成不明显的短喙或几无喙，侧萼片宽倒卵形，长1.3-1.4cm，内面先端膝状弯曲，瓣片长约1.1cm，唇长4.5mm，末端2浅裂，距长约2.5mm，向后弯曲，无毛;雄蕊多数，花丝全缘或具2枚小牙齿，无毛;心皮5，无毛。莴葖果。种子多数。花期7月，果期8月。
黄酮类化合物是自然界中一类重要的天然有机化合物，广泛存在于药用植物、水果和蔬菜中，特别是在高等植物的花、叶、根中较多[2]。黄酮类化合物具有多种生物活性，有抗溃疡、抗过敏、抗菌、抗炎、抗氧化、降血脂、治疗心脑血管疾病等功能。随着研究方法的不断更新和改进，新的黄酮类化合物不断被发现，其应用更加广泛[3]。目前，对大草乌的分析研究报道较少，为进一步开发大草乌的药用价值，本研究对野生大草乌中总黄酮的提取与抗氧化性进行分析，旨在为大草乌的研究与推广应用，以及推进药用植物的发展提供科学的依据。
大草乌(Aconitum vilmorinianum)为毛茛科植物黄草乌和膝瓣乌头的块根，主要分布于四川会理、贵州西部和云南中部，具有祛风散寒、活血止痛、解毒消肿的功效，主治风寒湿痹、手足厥冷、跌打损伤和疮毒[1]。大草乌有毒且苦，在云南种植及应用广泛，属于菜药兼用植物。
1 材料与方法
1.1 试验材料
野生大草乌购于云南省红河州个旧市集市，产地为个旧市老厂镇。大草乌样品先用去离子水冲洗干净，在105 ℃烘干，然后研细备用。
1.2 仪器与试剂
UV-4802S型紫外-可见分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司);BS224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);OSB-2100型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);TDL80-2B型台式离心机(上海安亭科学仪器厂);SHZ-Ⅲ型循环水真空泵(郑州长城科工贸有限公司);恒温烘箱;恒温水浴锅;索氏提取器;粉粹机。
芦丁对照品、无水乙醇、石油醚(60～90 ℃)、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、邻苯三酚、Tris等试剂均为分析纯;盐酸为优级纯;试验用水为去离子水。
1.3 大草乌总黄酮的提取
1.3.1 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的影响 分别准确称取4.000 0 g干燥的大草乌粉末6份，用滤纸包好后置于索氏提取器中，用100 mL石油醚在80 ℃条件下回流5 h，取除脂后的大草乌在60 ℃下烘干，分别用100 mL 40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液在85 ℃条件下回流2次，每次3 h，合并滤液后抽滤，55 ℃减压蒸馏至无醇味，4 800 r/min离心15 min，将上清液转移至100 mL容量瓶中，分别用相应体积分数的乙醇定容，得到大草乌总黄酮提取液[4-9]。
1.3.2 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响 分别准确称取4.000 0 g干燥的大草乌粉末5份，用滤纸包好后置于索氏提取器中，用100 mL石油醚在80 ℃条件下回流5 h，取除脂后的大草乌在60 ℃下烘干，用100 mL 70%乙醇溶液在85 ℃条件下回流2次，回流时间分别为1、2、3、4、5 h，合并滤液后抽滤，55 ℃减压蒸馏至无醇味，在4 800 r/min离心15 min，将上清液转移至100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容，得到大草乌总黄酮提取液。
1.4 分析方法
1.4.1 波长的选择 将标准溶液和样品溶液以乙醇为空白对照，在波长200～800 nm进行扫描，结果显示标准溶液和样品溶液在波长510 nm处有最大吸收，故选定510 nm为测定波长。
1.4.2 标准曲线的绘制 精确称取芦丁对照品5 mg，用60%乙醇溶解，并转移至50 mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，得到浓度为0.100 0 mg/mL的标准溶液。精确吸取芦丁标准溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL，分别置于10 mL比色管(此处试验所用仪器为比色管，用分光光度计测定时用比色皿)中，各加60%乙醇至5 mL，再分别加入5%(质量分数，下同)的NaNO2溶液0.50 mL，摇匀，室温放置6 min，加10%的Al(NO3)3溶液0.50 mL摇匀，室温放置6 min，加4%的NaOH溶液 4.00 mL摇匀，室温放置15 min，用紫外-可见分光光度计在510 nm波长下测定吸光度，同时以试剂空白作参比。以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C为横坐标，绘制标准曲线。
1.4.3 总黄酮含量的测定 准确吸取总黄酮提取液1.00 mL，置于10 mL比色管(此处试验所用仪器为比色管，用分光光度计测定时用比色皿)中，补加相应体积分数的乙醇至5 mL，其他步骤按“1.4.2”的方法操作，在510 nm波长下平行测定3次。根据回归方程，计算总黄酮浓度。根据公式：总黄酮含量=[提取液浓度(mg/mL)×稀释倍数×体积(mL)/样品干重(g)×1 000]×100%，计算大草乌总黄酮含量。
1.5 清除超氧阴离子自由基能力的测定
取4.5 mL 50 mmol/L的Tris-HCl缓冲溶液，加4.2 mL去离子水混匀后在25 ℃水浴中保温20 min，取出后立即加入在25 ℃预热过的3 mmol/L邻苯三酚0.3 mL，迅速摇匀后倒入比色皿，420 nm波长下每隔30 s测定吸光度，以10 mmol/L的HCl代替邻苯三酚作为空白对照。
按照上述操作步骤在加入邻苯三酚前先加入0.1 mL的总黄酮提取液，同样用10 mmol/L的HCl作空白对照，测定吸光度，并按以下公式计算清除率：
超氧阴离子自由基清除率=(A1-A2)/A1×100%
式中，A1为邻苯三酚自氧化平均吸光度;A2为加入样品后邻苯三酚自氧化平均吸光度。
2 结果与分析
2.1 标准曲线的绘制
以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C为横坐标， 绘制标准曲线，所得标准曲线如图1所示。所得回归方程为A=7.714 3C+0.004 3，R2=0.997 4。
2.2 不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮提取的影响
由表1可知，不积分数的增大，大草乌总黄酮的含量也逐渐增大;乙醇体积分数从70%升高到90%时，随着乙醇体积分数的增大，大草乌总黄酮的含量稍有减小，70%乙醇提取的大草乌总黄酮含量最高，达1.456%。说明，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为水溶性(大草乌水提取液能与氯化铁反应显示出较深的颜色)。
2.3 不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响
由表2可知，不同回流时间对大草乌总黄酮提取的影响不同。回流1～3 h时，随着回流时间的增长，大草乌总黄酮的含量逐渐增大;回流时间3～5 h，随着回流时间延长，大草乌总黄酮的含量有所减小，3 h时大草乌总黄酮含量最高，达1.457%。可能是回流时间过长会提取出其他成分与黄酮相互作用，使提取的总黄酮含量降低。
以上分析结果可知，用70%乙醇回流提取3 h，大草乌总黄酮含量最高。在此条件下，通过3次平行试验测定得到大草乌总黄酮含量为1.457%。
2.4 大草乌黄酮对超氧阴离子自由基的清除作用
通过测定，大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率达到34.49%。说明大草乌总黄酮具有一定的抗氧化作用。由此可见，大草乌具有较高的药用价值。
采用不同体积分数乙醇对大草乌总黄酮进行提取，大草乌中的总黄酮一部分为脂溶性，部分为水溶性，这与罗晶[10]对红景天分析的结果一致。本试验结果中测定的大草乌总黄酮含量为1.457%，与毕和平等[11]分析的穿心莲结果比较，大草乌中总黄酮含量比穿心莲的高，与刘伟玲[12]分析的刺五加叶中总黄酮的结果比较，大草乌中总黄酮含量则比刺五加叶中的低。说明不同药用植物中总黄酮含量不同。
本试验结果表明，以石油醚脱脂、乙醇回流可提取野生大草乌中总黄酮，提取的最佳条件为乙醇体积分数70%，回流提取时间3 h，此条件下提取的野生大草乌中总黄酮含量最高，达到1.457%。大草乌总黄酮对超氧阴离子自由基有明显的清除作用，清除率为34.49%，说明大草乌总黄酮具有一定的抗氧化作用，且具有较高的药用价值。
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