摘 要：为研究氨气与过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(简称复方消毒剂)相互中和的效果及氨气对消毒效果的影响，通过测定不同剂量512倍稀释的复方消毒剂，在不同作用时间、不同氨气浓度时，喷雾消毒前后气雾柜内细菌数量和氨气质量浓度，计算杀菌率和氨气中和率，以确定512倍稀释的复方消毒剂对氨气的中和效果及高浓度氨气对其杀菌效果的影响。结果显示：在氨气质量浓度为40.98mg/m3时，512倍稀释的复方消毒剂分别以15、30、60mL/m3剂量喷雾，作用30min后，氨气中和率分别为13.3%、17.8%、54.0%;在氨气质量浓度分别为40.98、48.57、56.16mg/m3时，512倍稀释的复方消毒剂以15mL/m3喷雾消毒，作用30min后，杀菌率分别为100%、99.6%、99.2%。结果表明：在氨气质量浓度40.98mg/m3，作用30min后，512倍稀释的复方消毒剂，喷雾剂量60mL/m3可实现理想的中和氨气效果，15mL/m3可实现理想的消毒效果。
关键词：过氧乙酸戊二醛复方消毒剂;氨气浓度;空气消毒;中和效果;杀菌效果
消毒剂可用于杀灭环境和传播媒介上的病毒和细菌等病原微生物，以阻断病原的传播流行。合理使用消毒剂消毒是养殖场生物安全控制的一项非常重要的措施[1]。消毒剂种类以及杀菌效果好坏，会直接影响畜禽养殖环境的生物安全，从而影响动物和人的健康与安全。某些畜禽养殖业消毒不规范，导致很多病原微生物对单一化学成分的消毒剂产生了较强的抵抗力[2]。而各类消毒剂合理复配后，其杀菌作用远大于单一种类消毒剂。过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(简称复方消毒剂)是一种低成本、高效、抗干扰的复方消毒剂，具有杀菌范围广和有效使用浓度低等优点[3]。
畜禽舍中的氨气主要来源于两方面：一是从动物胃肠道排出;二是堆积的排泄物和舍内的垫料等有机物质，经过微生物分解而产生[4]。畜禽舍内氨气的大量存在会对动物健康造成伤害。研究[5]发现：当鸡舍内氨气质量浓度达到15.18mg/m3时，鸡群食欲会明显下降，其生产性能及对抗各种疾病的抵抗力也会降低或减弱;当氨气质量浓度达到37.95mg/m3时，鸡只死亡率会明显增加。已有研究[6-7]表明，鸡舍内氨气平均质量浓度为18.58~36.07mg/m3。黄晓露等[8]发现，封闭式仔猪高床保育舍内的氨气质量浓度为30.36~32.63mg/m3;詹凯等[9]研究发现，猪舍内氨气质量浓度可达24.77mg/m3。总之，畜禽舍内氨气质量浓度一般不超过40mg/m3。我国农业行业标准[10]规定的畜舍环境中日均氨气质量浓度为：雏鸡舍不超过10mg/m3，成年鸡舍不超过15mg/m3，猪舍不超过25mg/m3，牛舍不超过20mg/m3。因此，必须及时清除养殖场舍中的氨气，使其降至合理的范围内。降低畜舍内氨气浓度的方法，除了减少氨气排放外，还可以通过化学方法，如喷洒过氧乙酸，其机理在于两者能够结合形成醋酸铵，同时还能达到消毒的效果[11]。
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复方消毒剂的主要有效成分是过氧乙酸，其喷雾消毒的氨气降低效果以及对消毒效果的影响尚不清楚。本试验旨在通过测定不同复方消毒剂剂量、不同喷雾作用时间的氨气浓度以及不同氨气浓度下的杀菌率，确定最低有效浓度的复方消毒剂对氨气的中和效果，以及高浓度氨气对其杀菌效果的影响，以期为该消毒剂的推广使用提供依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试剂与菌株 复方消毒剂(批号202001)，来自山西农业大学动物医学学院兽医病理实验室;甘氨酸(批号916S066)、卵磷脂(批号601l024)，Solarbio公司产品;吐温80(批号301C053)，天津市化学试剂三厂产品;硫代硫酸钠(批号800628-2)，天津市天力化学试剂有限公司产品;普通营养琼脂(批号00008-20190910)、普通肉汤琼脂培养基(批号00007-20170627)，青岛海博生物技术有限公司产品;氨水(批号201909)，天津市登丰化学品有限公司产品;白色葡萄球菌8032，山西农业大学动物医学学院兽医病理实验室保存。
1.1.2 仪器及设备 气雾柜，山西农业大学动物医学学院兽医病理实验室自制;全自动高压灭菌锅(型号HVE-50)，日本三洋集团产品;微量加样器(型号eppendorf)，ThermoElectron公司产品;超净工作台(型号SW-CJ-1F)，北京昌平长城空气净化工程公司生产;隔水恒温箱(型号ZXGP-A2050)，上海智城分析仪器制造有限公司产品;液体撞击式微生物气溶胶采样器(型号JWL-6)，金坛市华邦电子仪器有限公司产品;电子天平(型号AR124CN)，奥豪斯公司生产;电动气溶胶喷雾器(型号K-3)，上海羅迪公司生产;氨气测定仪(型号SGA-600-NH3)，深圳市深国安电子科技有限公司产品。
1.2 试剂配制
1.2.1 标准硬水配制 称取氯化钙(CaCl2)0.0608g和氯化镁(MgCl2·6H2O)0.0278g，然后加去离子水至200mL，完全溶解后121℃压力蒸气灭菌20min以备使用。
1.2.2 复方消毒剂配制 取4mL复方消毒剂用灭菌标准硬水做2倍系列倍比稀释，直至稀释倍数为512倍。
1.2.3 采样液配制 称取0.50g甘氨酸、0.10g卵磷脂、0.50g吐温80、0.25g硫代硫酸钠、1.80g普通肉汤琼脂定容至100mL，于121℃高压灭菌20min以备用。
1.3 试验方法
1.3.1 氨气中和试验 依据消毒技术规范[12]中的空气消毒试验操作程序，调节对照组和试验组气雾柜的温度为20~25℃，相对湿度为50%~70%。将0.5cm口径喷枪压力设定为0.5kPa，喷雾流量为5mL/min，向气雾柜内喷雾1mL25.0%的氨水，使气雾柜内氨气质量浓度为40.98mg/m3。待传感器的氨气质量浓度显示值稳定后(30min)，将不同剂量(7.5、15.0、30.0mL)512倍稀释的复方消毒剂或灭菌去离子水喷雾于气雾柜内，记录5、10、20、30min时的氨气质量浓度，并计算氨气中和率，重复3次。氨气中和率的计算方法：氨气中和率=(消毒前氨气质量浓度-消毒后氨气质量浓度)/消毒前氨气质量浓度×100%。
1.3.2 消毒效果影响试验
按照1.3.1中的方法调节气雾柜，向气雾柜内喷雾不同剂量(1.0、1.3、1.6mL)25.0%的氨水，待气雾柜内传感器的氨气质量浓度显示值稳定后(30min)，将5×106cfu/mL白色葡萄球菌悬液5mL均匀喷雾于气雾柜中，边喷雾染菌边开启风扇搅拌(使气溶胶均匀分散)，喷菌结束后再搅拌5min;静置5min后，对气雾柜使用添加中和剂的液体撞击式采样器进行消毒前采样，采样液10mL，采样流量7mL/min，采样8min。消毒前采样后，将15mL/m3的512倍稀释的复方消毒剂喷雾于气雾柜内，同时另一气雾柜以等剂量灭菌去离子水作为对照，密闭作用至规定时间(10、20和30min)采样，同时记录这3个时间点的氨气质量浓度。采样结束后，以5mL未使用的采样液冲洗采样瓶，冲洗液与已收集的10mL采样液混合均匀后，吸取1mL接种于营养琼脂培养基，37℃培养18h(各时间段样本均接种两个平皿)。
2 结果与分析
2.1 氨气中和效果
3次重复试验结果(表1)显示：512倍稀释的复方消毒剂或灭菌去离子水喷雾剂量≥15mL/m3，作用5min时，氨气质量浓度开始下降;随着喷雾剂量的增加和作用时间的延长，氨气中和率逐渐增大。当512倍稀释的复方消毒剂喷雾剂量达到60mL/m3，作用30min时，氨气中和率可达54.0%。
2.2 消毒效果影响
消毒效果试验结果(表2)显示：随作用时间延长，气雾柜内氨气质量浓度逐渐降低;随着氨气质量浓度的增加，复方消毒剂的消毒效果出现下降，而作用时间延长又使消毒效果增加。在氨气质量浓度达到40.98mg/m3，作用30min时，复方消毒剂对白色葡萄球菌气溶胶的杀灭率>99.9%，消毒效果合格;在氨气质量浓度>40.98mg/m3、作用30min时，消毒剂未达到合格消毒效果。
3 讨论
多项研究显示，有多种消毒剂可降低畜舍内氨气含量，效果也较好。崔东安[13]等将蓝光消毒剂(主要成分为二氧化氯)1:1000稀释喷雾消毒，分别作用4、8h后，氨气质量浓度可由30.36mg/m3降至5.31mg/m3，中和率为82.5%。孙天竹等[14]在不同条件下检测木醋液(主要成分为乙酸)对禽舍的除臭效果(臭气成分以氨气为主)，发现用60%的木醋液作用于鸡舍污泥16h以上，氨气中和率可达60%，除臭效果最佳。黄炎坤[15]等研究表明：喷洒0.5%过氧乙酸溶液作用3h后，可将12.86mg/m3氨气中和至4.62mg/m3，中和率为64.1%;喷洒0.5%过氧乙酸溶液作用6h后，细菌总数会出现明显降低，杀菌率为46.6%。
本研究显示，512倍稀释的复方消毒剂喷雾量为15mL/m3，在氨气质量浓度≤40.98mg/m3，作用30min时，对白色葡萄球菌的杀灭率可达100%，可将氨气质量浓度从40.98mg/m3降至27.60mg/m3，除氨效果明显，消毒合格。但当氨气质量浓度达到48.57mg/m3以上，作用30min时，消毒则不合格，表明512倍稀释的复方消毒剂进行空气消毒时，若想达到理想的消毒效果，氨气的质量浓度须小于40.98mg/m3。
本研究表明：在氨气质量浓度40.98mg/m3，作用30min后，512倍稀释的复方消毒剂，喷雾剂量60mL/m3可实现理想的中和氨气效果，15mL/m3可实现理想的消毒效果。——论文作者：田永清1，廖夏露2，郑明学2，康慧鑫2，段步婷2
