【摘 要】目的：研究注射用血栓通(冻干)与盐酸克林霉素注射液配伍的毒性和含量变化情况，为临床合理用药提供依据。方法：通过小鼠急性毒性试验，了解两者配伍后毒性变化;采用高效液相方法检测两者配伍后含量变化情况。结果：注射用血栓通(冻干)与盐酸克林霉素注射液配伍前后主要成分含量无明显变化，但两者配伍后毒性增加。结论：注射用血栓通(冻干)与盐酸克林霉素注射液不宜在临床上配伍使用。
【关键词】注射用血栓通(冻干);盐酸克林霉素注射液;配伍;毒性;含量
注射用血栓通(冻干)是由三七传统用药部位主根提取三七总皂苷制成的静脉注射剂，说明书功能主治为活血祛瘀，通脉活络，用于瘀血阻络，中风偏瘫、胸痹心痛及视网膜中央静脉阻塞症。注射用血栓通(冻干)临床广泛用于心脑血管、视网膜中央静脉阻塞等疾病的治疗。盐酸克林霉素注射液属注射剂类抗菌素，用于各种中、重度感染性疾病。在临床实际运用中，注射用血栓通(冻干)往往会与抗生素联合使用，有报道注射用血栓通(冻干)联合头孢类抗生素引起五例不良反应[1]，不良反应表现为皮疹、瘙痒。目前尚未见注射用血栓通(冻干)与盐酸克林霉素注射液合用配伍的研究报道。因此，本研究主要了解注射用血栓通(冻干)与盐酸克林霉素注射液配伍的毒性和含量变化情况，为临床合理用药提供依据。
1 材料
1.1 实验动物
昆明小鼠，18g～22g，由广西梧州制药(集团)股份有限公司动物实验研究中心提供，许可证号： SCXK- 桂 2018-0002。
1.2 药物与试剂
注射用血栓通(冻干)(批号：17060415)，由广西梧州制药(集团)股份有限公司生产;盐酸克林霉素注射液(批号：X170312)，购自重庆莱美药业股份有限公司;乙腈为色谱纯(批号：R141298)，购自 DIKMA 公司;克林霉素对照品(批号：130664-201401)，购自中国食品药品检定研究院;三七总皂苷对照品(批号：110870-201603)，购自中国食品药品检定研究院。
1.3 实验仪器
低速大容量多管离心机;生化培养箱;电子天平;高效液相色谱仪。
2 方法
2.1 急性毒性试验
小鼠按体重大小、雌雄各半的原则随机分组，每组 10 只。将注射用血栓通(冻干)、盐酸克林霉素注射液配制成系列浓度，制备混合样品制成系列浓度，其中固定注射用血栓通(冻干)的浓度为最大给药浓度 75mg·kg-1，浓度为 3.75mg·mL-1。每只 0.02mL·g-1 尾静脉注射给药，给药后连续观察 7d，每天记录各剂量组小鼠的死亡数，求出各药剂量对数与死亡概率的回归方程，计算混合物对小鼠的 LD50[2]。
2.2 含量测定
2.2.1 供试溶液配制
(1)注射用血栓通(冻干)溶液配制(A 溶液)：精密称定注射用血栓通(冻干)125mg，置 25mL 量瓶中，加氯化钠注射液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
(2)盐酸克林霉素注射液溶液(B 溶液)：直接精密吸取盐酸克林霉素注射液 2mL，置 50mL 量瓶中，加氯化钠注射液稀释至刻度，摇匀，即得。
(3)混合溶液(C 溶液)：精密称定注射用血栓通(冻干)125mg，置 25mL 量瓶中，滴加上述盐酸克林霉素注射液 B 溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.2 测定三七总皂苷各成分的含量
采用注射用血栓通(冻干)质量标准的含量测定方法。色谱柱：Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm);流动相：乙腈-水(梯度洗脱);检测波长：203nm;流速：1.0mL·min-1;进样量：10μL。对照品溶液的制备：三七总皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1mL 含 4mg 的溶液，摇匀，即得。供试溶液的制备：精密吸取“2.2.1”项下 A、C 适量，加甲醇分别制成每 1mL 含 4mg 的溶液，分别作为单组份供试液、混合液供试液。
2.2.3 盐酸克林霉素注射液含量测定
采用盐酸克林霉素注射液质量标准的含量测定方法。 色谱柱：Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm);流动相：磷酸二氢钾溶液(每 1mL 中含磷酸二氢钾 6.8mg，用 25%氢氧化钾溶液调节 pH 值至 7.5)-乙腈(55∶45);检测波长： 210nm;流速：1.0mL·min-1;进样量：20μL。对照品溶液的制备：取克林霉素对照品本品适量，精密称定，用流动相定量稀释制成每 1mL 中含克林霉素 1mg 的溶液，摇匀，即得。供试溶液的制备：精密吸取“2.2.1”项下 B、C 适量，加流动相分别制成每 1mL 含 1mg 的溶液，分别作为单组份供试液、混合液供试液。按上述色谱方法分别测定“2.2.1”项下三种溶液中三七总皂苷中三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1和人参皂苷 Rd 的含量和克林霉素含量，然后将上述三种溶液放置 4h 后，再按上述色谱方法测定。通过比较 0h 和 4h 含量变化，考察注射用血栓通(冻干)和盐酸克林霉素注射液配伍后对相互含量的影响大小。
3 结果
3.1 急性毒性试验结果
注射用血栓通(冻干)5 个剂量组 840.0mg·kg-1、756.0 mg·kg-1、680.4mg·kg-1、612.4mg·kg-1、551.1mg·kg-1，对应的小鼠死亡数分别为：10 只、8 只、4 只、2 只和 0 只;盐酸克林霉素注射液溶液 5 个剂量组 280.0mg·kg-1、252.0mg·kg-1、 226.8mg·kg-1、204.1mg·kg-1、183.7mg·kg-1，对应的小鼠死亡数分别为：10 只、9 只、8 只、3 只和 0 只;混合液 4 个剂量组 226.8mg·kg-1、204.1mg·kg-1、、183.7mg·kg-1、157.2mg·kg-1，对应的小鼠死亡数分别为：10 只、6 只、4 只和 0 只。注射用血栓通(冻干)回归方程：Probit(A)=-64.682+22.801 ×lnX(X 为注射用血栓通(冻干)剂量);盐酸克林霉素注射液溶液回归方程：Probit(B)=-59.600+25.535×lnX(X 为克林霉素剂量)。计算得到 Q=4.73。因此，可以认为两者配伍后毒性增强。实验结果见表 1 所示。
3.2 含量测定结果
3.2.1 注射用血栓通(冻干)溶液中三七总皂苷各成分的含量测定结果
根据 SPSS 16.0 统计，注射用血栓通(冻干)溶液中三七总皂苷的三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1和人参皂苷 Rd 在 0h、4h 测定的含量比较，无统计学差异(P>0.05)，即提示注射用血栓通(冻干)溶液中三七总皂苷的三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1 和人参皂苷 Rd 在 4h 内含量稳定。注射用血栓通(冻干)溶液中三七总皂苷各成分的含量测定结果如表 2 所示。
3.2.2 盐酸克林霉素注射液溶液中克林霉素含量测定结果
由于 P>0.05，故可认为 0h、4h 测定含量数据无统计学差异，提示盐酸克林霉素注射液溶液中克林霉素 4h 内含量稳定。盐酸克林霉素注射液溶液中克林霉素含量结果如表 3 所示。
3.2.3 混合液的含量测定结果
分别检测混合液中三七总皂苷的三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1和人参皂苷 Rd 的含量和克林霉素含量。根据混合液中三七总皂苷各成分的含量结果(见表 2)，由于 P>0.05，故可认为 0h、4h 测定的含量数据无统计学差异，提示混合液在 4h 内三七总皂苷各成分的含量稳定。
根据混合液中克林霉素含量结果(见表 3)，由于 P>0.05，故可认为 0h、4h 测定的含量数据无统计学差异，提示混合液在 4h 内克林霉素含量稳定。
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4 讨论
急性毒性(Acute toxicity)是指药物在单次或 24h 内多次给予后一定时间内所产生的毒性反应。狭义的单次给药毒性研究(Single dose toxicity study)是考察单次给予受试物后所产生的急性毒性反应。本指导原则所指为广义的单次给药毒性研究，可采用单次或 24h 内多次给药的方式获得药物急性毒性信息。单次给药毒性试验所获得的信息对重复给药毒性试验的剂量设计和某些药物临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量所致急性中毒相关的信息[4]。
《中药注射剂临床使用基本原则》中规定功能相同或基本相同的中成药联合使用时不宜叠加，两种以上中药注射剂联合应用应遵循主治功效互补及增效减毒原则。中药注射剂由于成分复杂，当与其他药品配伍后，可发生氧化或聚合等反应，或者由于配伍引起 PH 变化而析出不溶性微粒[4,5]，导致不良反应的发生。转化糖电解质与注射用血栓通配伍液含有不同粒径和数量的不溶性微粒，且均超过2010年版《中华人民共和国药典》标准[6]。转化糖电解质与注射用血栓通配伍可导致微粒超标。注射用血栓通(冻干)的说明书【药物相互作用】尚无本品与其他药物相互作用的信息。盐酸克林霉素注射液的说明书【药物相互作用】提到本品不宜加入组份复杂的输液中，以免发生配伍禁忌。由于盐酸克林霉素注射液单独使用也能导致不良反应，与注射用血栓通(冻干)合用后可导致过敏源增加，从而提高了不良反应发生率。
在本研究中，采用了概率和法(method of probability sum)，用 Q 值反映配伍间的关系，如作用单纯相加、增强、显著增强、拮抗或显著拮抗。而本实验结果表明，注射用血栓通(冻干)与盐酸克林霉素注射液配伍后急性毒性增强。因此，在临床上，注射用血栓通(冻干)和盐酸克林霉素注射液不宜配伍使用，以减少可能的不良反应。由于注射用血栓通(冻干)与盐酸克林霉素注射液的混合液中三七总皂苷的三七皂苷 R1、人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rb1和人参皂苷 Rd 含量和克林霉素含量变化不大，而急性毒性增强，可能因为注射用血栓通(冻干)有 5 个主要成分，组份复杂，这需要进一步对两者配伍进行研究，比如配伍后的 PH 值、粒径、渗透压等。
综上所述，注射用血栓通(冻干)和盐酸克林霉素注射液在临床上不宜配伍使用，如确实不可避免需要联合使用，则需采用间隔给药及冲管等方式，以减少可能的不良反应事件发生。
